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实验室如何检测及解决PCR污染的方法

贵州博之远贸?#23376;?#38480;公司2019年9月3日 5:49 点击:146

生物实验,大多数实验检测都是微观的,基于细胞,分子,蛋白水平,而这些微观样本对外界环境的影响敏感,比如温度、ph值、酶解、损伤等,在我们尽力呵护样本的生存环境的同时,污染也是需要注意的头等大事,要坚决避免环境中的“杂质”的乱入,包括样本污染,试剂仪器交叉污染、产物气溶?#20309;?#26579;等对实验结果的影响。“易查不易察?#20445;?#27745;染来的悄无声息,防不胜防,假阳性结果让无数生物学子抓狂和崩溃。

?#29615;?#19968;起来扒一扒生物实验室污染之PCR实验污染你不知道的事。

在众多的生物实验室,分子生物学检测方法如PCR因其高灵敏度、快速、操作方便等优势已经被广泛应用,不过正是由于它灵敏度极高,极微量的污染源都有可能导致检测结果的假阳性,所以对环境污染的控制也极为?#32454;瘛?#38754;对众多的污染源,比如样本交叉污染、试剂仪器交叉污染、克隆质粒污染、PCR扩增产物污染、还有极容易忽视的气溶?#20309;?#26579;,气溶胶是由固体或液体小?#23454;?#20998;散并悬浮在气体介质?#34892;?#25104;的胶体分散体系,在空气与液体面摩擦时,比如在操作时比较剧?#19994;?#25671;动反应管,开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝,因而由其造成的污染是一个非常重要而被忽视的污染源。

虽然这些污染对PCR实验结果的影响已经受到了广泛重视,多数实验室对污染控制都采取了各种办法,比如定期大扫除清理、划分操作区域、试剂分装、操作谨慎、重复实验、多角度验证结果。但是微量的核酸片段就能被扩增,所以对污染物的控制不仅仅是做到这些就能?#27426;?#32477;和避免的,关键是需要从源头控制。目前多数生物试验室,分子实验每天都在大规模进行,污染源已经无处不在,特异性的,非特异性的,同源的,非同源的,广泛分布在样本容器、实验室台面,试剂溶液中、仪器表面内管附着等等,你以为普通的清理就能解决这些污染源吗?必须是不行的,实验室大拿们都为了清除这些污染源研究出好多种方法,整理跟大家共享。

传统方式

原理

优势

不足

酒精擦拭

将核酸沉淀,擦拭后保证污染表面污染得到?#27426;?#31243;度缓解

简单、方便、成本低

不彻底(核酸片段本身没有变化,仍然存在导致气溶?#20309;?#26579;的可能性)、细小孔径器材无法清除

修饰

标记遗传物质,阻止聚合酶与核酸的结合,从而抑制DNA扩增

效果相对好

反应可逆、成本高、试剂可能具有不安全影响

酶解

酶?#23665;?#38271;链的核酸分子降解成小片段

速度快,效果相对较好

降解的核酸中?#26434;?#22823;片段存在,具有完整的遗传信息,可通过PCR扩增出完整的片段、成本高

高压变性

高压?#23665;?#26680;酸降解成20~30bp的小片段

彻底,成本低

仅适用于耐高?#20849;?#26009;,更无法应用实验操作台和大型的实验设备

紫外照射

PCR产物中嘧啶碱基会形成二聚体,?#30001;?#32456;止

方便,?#27573;?#24191;,成本低

仅对500bp以上长片段?#34892;В?#23545;短片段效果不大,?#20063;?#19981;是DNA链中所有嘧啶均能形成二聚体,且UV照射还可使二聚体断裂

(来源: 贵州博之远贸?#23376;?#38480;公司


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