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商品編號:72128
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BI MSCgo?間充質干細胞成軟骨誘導分化試劑05-220/05-221

價    格:詢價

產    地:其他國家更新時間:2019/7/15 13:41:34

品    牌:BI型    號:05-220/05-221

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山東博科干細胞應用研究院有限公司

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等     級: (第 6年)

性     質:生產型,貿易型,

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產品描述

MSCgo?成人骨髓間質干細胞成軟骨誘導分化培養基試劑盒,不含血清,無異源,適用于不同來源的MSC,如骨髓、軟骨組織和臍帶組織;hMSC-BM,hMSC-AT,hMSC-CT

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成軟骨結果

3D培養hMSC分化成軟骨細胞,典型的細胞外基質富集蛋白多糖,形成軟骨。蛋白多糖可以作為軟骨形成的一個指標,并且可以Alcian Blue(深藍色的含銅染料)染色檢測。Alcian Blue染色是成熟軟骨細胞的標志。不同的hMSC(細胞類型、年齡、代數)染色強度不一致。

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試劑盒組成

MSCgo?間質干細胞成軟骨誘導分化培養基試劑盒

產品描述

儲存

貨號

規格

MSCgo? ? Chondrogenic Differentiation Basal Medium

2-8°C

05-220-1B

100ml

MSCgo? Chondrogenic ? Differentiation Supplement Mix

-20°C

05-221-1D

10ml

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完全培養基配制

1???????室溫下解凍Supplement Mix。

2???????將Supplement Mix 用1:10倍的Chondrogenic Basal Medium稀釋(如:10ml Supplement Mix+90ml?Basal Medium

3???????完全培養基可在2-8°C儲存一個月。

所需材料

??MSCgo? Chondrogenic Differentiation: BI; 05-220-1 and 05-221-1.

? 96-well U-bottom,?非組織培養處理的板(懸浮培養)。(BD FALCON; 35-1177, 或 CELLSTAR; 650185 Greiner)

? MSC NutriStem? XF : BI; 05-200-1 and 05-201-1.

??可選- Alcian Blue 8 GX (Sigma; A-3157)。建議選擇Vivacell品牌,間充質干細胞成軟骨分化染色試劑盒,貨號: C37B00150

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成軟骨誘導分化操作

1.?????接種hMSC,3D培養在 96-well U-bottom 培養板中每孔加入100μl MSC NutriStem? XF,接種1x105細胞 (30-40x104?cells/cm2)。無需預包被。

注意:微量培養技術也是一個選擇并且可以激發球形細胞的形成:接種10μl 1x107cells/ml 入板的中心(最終1x105cells/well),使其貼壁2小時,然后加入培養基0.1ml/well。

2.?????置于37°C,5% CO2培養箱中培養。在24-48小時內會自發形成球狀體。

3.?????分化:培養24小時后,將MSC NutriStem? XF培養基吸除,每孔加入0.2ml分化培養基。

4.?????置于37°C,5% CO2培養箱中培養14-21天。

注意:培養時間長,將得到更成熟的軟骨細胞(Alcian Blue染色強度更大)。

5.?????每3-4天更換分化培養基(0.2ml/well)。

注意:小心不要吸入球狀體。

6.?????評估軟骨形成:使用Alcian Blue染色。蛋白多糖-軟骨形成的標志,被染成深藍色。

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Alcian Blue染色操作(可選)

制備1% Alcian Blue 溶液

l??將0.2g Alcian Blue 8 GX (Sigma;A-3157)溶解于20ml 99%異丙醇0.1N HCl中。

l??用0.45 μm注射器(如:Minisart 16555)過濾。

l??溶液置于2-8°C儲存一年。

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Alcian Blue染色過程

注意小心操作不要吸入球狀體。

l??吸除培養基,用DPBS洗一次(BI;02-023-1,0.2ml/well)

l??固定:吸除DPBS,每孔加入0.2ml 10% 福爾馬林(4% 甲醛)。室溫固定30-60分鐘。

l??吸除福爾馬林,每孔用0.2ml 蒸餾水洗滌2次。

l??吸除蒸餾水,每孔加入0.2ml 1%Alcian Blue染色工作液。室溫過液,注意避光。

l??吸除染液,每孔用0.2ml 0.1N HCl洗滌2-3次。

l??吸除HCl,每孔加入0.2ml 蒸餾水。

l??觀察成軟骨染色效果,圖像采集,及軟骨形成評估。

注意:軟骨含有蛋白多糖保持藍色,而球狀體不含蛋白多糖在洗滌步驟中失去染色。


半定量Alcian Blue染色(可選)

l??每孔用0.15ml 8M Guanidine HCH溶液(GuHCl,Sigma;G9284)洗脫染料。

l??2-8°C過夜。

l??600nm?測OD值(8M Guanidine HCH溶液作為空白對照)。






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