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現在位置首頁>實驗試劑制品>干細胞>干細胞分化> BI MSCgo?間充質干細胞成脂誘導分化試劑 05-330/05-331/05-332

商品編號:72129
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BI MSCgo?間充質干細胞成脂誘導分化試劑 05-330/05-331/05-332

價    格:詢價

產    地:其他國家更新時間:2019/7/15 13:41:34

品    牌:BI型    號:05-330/05-331/05-332

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山東博科干細胞應用研究院有限公司

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等     級: (第 6年)

性     質:生產型,貿易型,

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產品描述

MSCgo?間質干細胞成脂誘導分化培養基試劑盒,不含血清,無異源,適用于不同來源的MSC,如骨髓、脂肪組織和臍帶組織;hMSC-BM,hMSC-AT,hMSC-CT

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成脂結果

倒置顯微鏡觀測到脂滴累積形成球形細胞,表明hMSC分化成脂。使用不同的hMSC(細胞類型、年齡、代數)得到的分化細胞數量也不一樣。

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試劑盒組成

MSCgo?間質干細胞成脂誘導分化培養基試劑盒

產品描述

儲存

貨號

規格

MSCgo? ? Adipogenic Differentiation Basal Medium

2-8°C

05-330-1-1B

100ml

MSCgo? ? Adipogenic SF,XF Supplement Mix I

-20°C

05-331-1-01

100μl

MSCgo? ? Adipogenic SF,XF Supplement Mix II

-20°C

05-332-1-15

1.5ml

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試劑配制

1???????室溫下解凍2個Supplement Mix。

2???????將0.1ml Supplement Mix I與 1.5ml Supplement Mix II 加入到100ml Adipogenic Basal Medium 中,于2-8°C儲存。

3???????完全培養基可在2-8°C儲存一個月。

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所需材料

BI: 05-330-1 ,05-331-1,05-332-1

? MSC NutriStem? XF : BI;05-200-1,05-201-1

? MSC Attachment solution XF : BI;05-752-1

? 可選: Oil Red O,Sigma;O0625

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成脂誘導分化操作

接種hMSC

1???????用MSC Attachment solution (BI;P/N: 05-752-1,1:100 DPBS 稀釋) 預包被24孔盤,每孔加入0.5ml MSC NutriStem? XF,接種6x104?細胞 (3x104?cells/cm2)。注意:若使用其他培養器皿,請適當調整體積。

2???????置于37°C,5% CO2?培養箱中培養。

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分化

1???????培養24h后即細胞融合度達到80-90%時,將MSC NutriStem? XF 培養基吸除,每孔加入0.5ml分化培養基。

注意:若細胞融合度<80%,繼續再培養一天。

2???????置于37°C,5% CO2?培養箱中培養14-21天,參照以下建議的替代培養基。

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根據hMSC類型的替代培養基方法

不同來源的hMSC具有不同的多向分化潛能。例如,hMSC-AT需要較短的誘導期(~ 6天),而比hMSC-BM和hMSC-CT需要10天誘導期。

注意

l??對于所有不同類型的hMSC,誘導成脂后建議使用維持培養基。

l??避免將液體直接加入到脂肪細胞上,需要非常小心移液,因為脂肪細胞是脆弱的。

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hMSC-AT:

一個分化周期/維持培養基

l??6-8天使用完全成脂分化培養基,建議每3-4天換液。

l??成脂誘導完成后,用維持培養基(MSC NutriStem? XF(05-200-1,05-201-1 ,BI))替代分化培養基,培養3-4天。

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hMSC-BM:

一個分化周期/維持培養基

l??8-12天使用完全成脂分化培養基,建議每3-4天換液(0.5 ml/well)。

l??成脂誘導完成后,用維持培養基(MSC NutriStem? XF (05-200-1,05-201-1 ,BI))替代分化培養基,培養3-4天。

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hMSC-CT:

至少兩個分化周期/維持培養基

l??5-10天使用完全成脂分化培養基,建議每3-4天換液(0.5 ml/well)。

l??成脂誘導完成后,用維持培養基(MSC NutriStem? XF (05-200-1,05-201-1)替代分化培養基,培養3-6天,每2-4天換液。

l??重復培養周期直到觀測到成熟脂肪細胞(即脂滴的形成)。



Oil red-O?染色分析 (可選)

Oil red-O?用于染色脂滴。

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Oil red-O?染色儲存液制備

l??將0.35g Oil Red-O (Sigma;O0625) 溶解到100ml 99%異丙醇中。

l??用0.2 或 0.45 μm PTFE 濾膜(如:Minisart SRP 17575)過濾。

l??溶液置于2-8°C儲存一年。

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Oil red-O?染色工作液制備

l??將6ml Oil red-O 染色工作液與4ml 蒸餾水混合。

l??混合均勻,室溫下靜置10-20 分鐘。

l??用0.2 或 0.45 μm PTFE 濾膜(如:Minisart SRP 17575)過濾。

l??2-3?小時內使用。

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Oil red-O?染色過程

l??吸除培養基,用DPBS洗一次(1ml/well)

l??固定:吸除DPBS,每孔加入1ml 10% 福爾馬林(4% 甲醛)。室溫固定30-60分鐘。

l??吸除福爾馬林,用1ml 60%的異丙醇洗滌2-3分鐘。

l??吸除異丙醇,每孔加入1ml Oil red-O 染色工作液。

l??室溫靜置10-30分鐘。

l??用1ml 蒸餾水洗滌,去除多余的染料。

l??置于顯微鏡下觀察成脂染色效果及圖像采集。

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半定量Oil red-O 染色 (可選)

l??每孔用0.5ml 100%異丙醇洗滌染料。

l??室溫下靜置1小時。

l??確定所有Oil red-O溶解在溶液中。

l??500nm?測OD值(100% 異丙醇作為空白對照)。







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